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微生物代谢组学分析

  与植物和动物代谢组学相比,微生物在生长培养基中浓度较低,具有低浓度代谢物难于检测,胞内和胞外代谢物不易分离等特点。微生物代谢组学主要进行胞内代谢物的分析,由于细胞内的酶系活跃、代谢物转换迅速,因此取样和样品制备的方法会显著影响分析结果的准确性和重复性。

  

  灭活过程中如何保持细胞的完整性, 防止胞内代谢物的泄漏, 以正确反映微生物细胞的生理状态, 是微生物代谢组学研究的关键。目前还没有通用的微生物淬灭和代谢物提取的方法,根据不同的微生物特性选择合适的淬灭方法在微生物代谢组学研究中非常重要。

  

  淬火的方法一般有:

  

  1、超滤性膜快速过滤后立即冰冻细胞;

  

  2、用高氯酸稀释细胞;

  

  3、在-45℃甲醇溶液中稀释细胞;

  

  4、培养基置入液氮快速冷冻、解冻、离心收集细胞;

  

  5、用带有预冷的不锈钢珠的注射器迅速取样、过滤收集细胞。

  

  样品采集原则

  

  我们处理过的微生物有大肠杆菌,乳酸菌,红曲菌等。

  

  一、微生物样本:

  

  1)快速取样,酶迅速失活,保持细胞的完整性;

  

  2)最大限度的提取代谢物;

  

  3)无偏向性, 不排除具有特殊物理、化学性质的分子;

  

  4)不破坏或改变代谢物的物理或化学特性。

  

  样品采集步骤

  

  微生物样品淬灭以后冻成干粉,干冰低温寄送。样品量大于200mg。